1 原理
化学发光试剂盒(CLIA kit)采用 Streptavidin-HRP 及增强型的 ECL 发光体系作为发 光底物试剂来实现检测过程的试剂盒。
将代测样本加入到固相包被有抗体的黑色不透明微孔板 中,辣根过氧化物酶的结合物和抗体特异性结合。洗去未反应的 游离成分。加入鲁米诺(Luminol)发光底液,并由光子计数器 读出各孔的相对光度值(RLU),检测原理见右图。
化学发光检测技术由于其灵敏度高,且不存在放射性污染而 被称为最有前途的实验室诊断方法之一。
2 特点
化学发光试剂盒的特点:
检测范围跨度大
CLIA 由于线性动力学范围宽,就能同时解决由蛋白含量过高超出 ELISA 检测范围而需要对 样本进行稀释,而同时低浓度的样本在稀释后信号检测不到的问题。如人 C 反应蛋白是一 种急性期蛋白,其含量在不同状态有数百倍的变化,使用优尔生 CLIA Kit for C Reactive Protein ,Human (SCA821Hu ) 对于各种含量的样本可以直接进行相同稀释倍数检测。
加样量少;对应一些很难获得的样本,如一些小鼠的尿液样本获得非常困难,优尔生发光试 剂盒针对这样的指标,样本加样量可为 50ul,极大的节约了用户的样本。
灵敏度高,某些样本代测物种含量很低,如检测人绒毛膜促性腺激素(hcG)极低含量样本使 用 ELISA 检测试剂盒很难检测出来。使用 CLIA Kit for Chorionic Gonadotropin (CG), SCD216Hu,最低检测限可到 2.35pg/ml,见下面的例子。
3、HCG 为例用两种试剂盒检测样本数据 为例用两种试剂盒检测样本数据 为例用两种试剂盒检测样本数据
从数据中可以发现样本在 huO2,huO3 使用 ELISA 检测试剂盒的时候,测值仅为 0.160,, 0.170 不落在标准曲线范围内。
而使用 CLIA Kit 进行检测,huO2,huO3 这两个样本测值(RLU),分别为 465,497 落在标准曲线中,可以计算出浓度为别为:13.55pg/mL 和 19.19pg/mL
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