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疾病-医工文献检索
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以 LC-MS/MS 等方法测定纳米药物的血药浓度—时间曲线与药代动力学参数，评价长循环与缓释特性。
技术要点
- ●方法学验证：线性、精密度、回收率、基质效应。
- ●采样设计：覆盖吸收、分布、消除相，一般 6–8 个时间点。
- ●内标法：同位素内标或结构类似物内标。
- ●组织分布：结合组织浓度评估靶向。
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采用活体荧光成像与组织定量评价纳米载体在动物体内的靶向分布与富集。
技术要点
- ●荧光探针选择：近红外（650–900 nm）穿透深、背景低。
- ●给药与时间点：多时间点成像绘制分布动力学。
- ●被动 vs 主动靶向：EPR 效应与配体靶向的区分。
- ●离体定量：成像背景扣除与组织自发荧光校正。
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以 qPCR、Western Blot 等手段检测纳米药物对细胞基因与蛋白表达的影响。
技术要点
- ●引物/抗体验证：确保特异性和扩增/结合效率。
- ●内参与重复：设置内参基因与生物学重复（n ≥ 3）。
- ●定量分析：ΔΔCt 法或灰度定量。
- ●通路检测：检测凋亡、增殖、免疫等相关标志物。
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体外评价纳米药物的细胞毒性/药效，测定 IC50、凋亡与活死状态，比较游离药与载药体系。
技术要点
- ●细胞模型：选择靶细胞与正常细胞对照，评估选择性。
- ●浓度梯度：设置合理梯度以准确拟合 IC50。
- ●时间点：24/48/72 h 评价时效关系。
- ●对照设计：空白载体、游离药、载药载体、联合用药。
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定量测定药物进入细胞的数量与入胞机制，评价载体的胞内递送效率。
技术要点
- ●洗脱彻底：充分洗涤去除胞外游离药物，避免高估。
- ●定量方法：荧光/HPLC/LC-MS/MS，需方法学验证（线性、回收率）。
- ●归一化：以蛋白量或细胞数校正，保证可比性。
- ●机制实验：多种内吞抑制剂 + 低温对照。
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以共聚焦荧光显微镜观察载体与药物的细胞内定位与分布，直观呈现靶向结合与入胞过程。
技术要点
- ●多色标记：载体、细胞器与细胞核分别用不同荧光通道，避免光谱串扰。
- ●孵育时间梯度：观察入胞与胞内转运过程。
- ●共定位分析：定量计算与溶酶体/线粒体等的共定位程度。
- ●三维成像：Z-stack 重建反映空间分布。
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以流式细胞术定量分析纳米载体对靶细胞的识别、结合与摄取，比较靶向与对照细胞、竞争抑制。
技术要点
- ●荧光标记策略：包载荧光染料或荧光标记配体，注意标记对靶向性的影响。
- ●孵育条件：时间、温度（4 ℃ 抑制内吞以区分结合 vs 摄取）、浓度。
- ●对照设计：受体阴性细胞、游离配体竞争、未修饰载体对照。
- ●数据指标：平均荧光强度（MFI）、阳性细胞比例、摄取抑制率。
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从储存稳定性、血清稳定性与胶体稳定性三个维度系统评价纳米载体，量化关键指标随时间的变化。
技术要点
- ●多温度多时间点：4 ℃/25 ℃/37 ℃ 下 0/1/3/7/14/30 天取样。
- ●关键指标追踪：粒径、PDI、Zeta、载药量、泄漏率。
- ●血清稳定性：50% 血清孵育，监测粒径与药物泄漏。
- ●稀释稳定性：模拟体内稀释后的行为。
